Українська версія
English version
Державна установа
"Інститут генетичної та регенеративної медицини
Національної академії медичних наук України"
       
Про інститут Наукові відділи Конференції
 
 
Персональний кабінет:
Логін*:
Пароль*:
  Реєстрація | Ввійти
Головна» Наукові відділи» Відділ клітинних та тканинних технологій» Лабораторія клітинних та тканинних культур» Фенотипування та сортування клітин»
МЕНЮ
 
  Про інститут
  Наукові відділи
  Конференції
  Оголошення
  Проекти
  Співпраця
  Державні закупівлі
  Web-ресурси
  Контакти


Фенотипування та сортування клітин
 

 Лабораторія клітинних та тканинних культур

 picture

Фенотипування та сортування клітин
на проточному цитофлюориметрі-сортері BD FACSAria

Завідувач лабораторії клітинних та тканинних культур, к.мед.н.
Кирик Віталій Михайлович
 
e-mail: biomedpost@gmail.com

 

Лазерний проточний цитофлюориметр-сортер FACSArіa виробництва компанії Becton Dіckіnson є одним з найбільш високотехнологічних та універсальних приладів, що може бути використаний і як цитометр-аналізатор, і як повноцінний сортер клітин.

Проточний цитофлуориметр BD FACSArіa підтримує мультипараметричний аналіз із одночасною реєстрацією 11 параметрів в одній пробі - 2 параметри світлорозсіювання і до 9 параметрів флуоресценції.

 

Конфігурація приладу: 3-лазерна, 9 детекторів флюоресценції та детектори прямого і бокового світлорозсіювання:
- 488 нм (блакитний) напівпровідниковий лазер Coherent Sapphire з системою детекторів BD Octagon™: детектор бокового світлорозсіювання та 5 детекторів флюоресценції, 
- 633 нм (червоний) гелій-неоновий лазер JDS Uniphase HeNe з системою детекторів BD Trigon™: 2 детектори флюоресценції
- 407 нм (фіолетовий) твердотільний лазер Point Source Violet з системою детекторів BD Trigon™: 2 детектори флюоресценції
Детальніше про конфігурацію детекторів та вибір флюорохромів...

Встановлені модулі:
Система Warming/Cooling - water recirculation unit для підтримання температури сортованого матеріалу
ACDU – advanced cell deposition unit для сортування в культуральні планшети

Сортер BD FACSArіa володіє рядом унікальних технічних характеристик, що виділяють його серед інших приладів з подібними функціями.
Детальніше про характеристики приладу...

 

Можливості застосування цитофлюориметра-сортера FACSArіa

 Області досліджень

  • Імунологія
  • Гематологія
  • Клітинні технології
  • Онкологія
  • Молекулярна біологія
  • Генетика
  • Фармакологія
  • Цитологія

Основні методики

- імунофенотипування клітин за поверхневими маркерами 

  • абсолютна та відносна кількість субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові (T-, B-, NK)
  • абсолютна та відносна кількість стовбурових клітин периферичної крові, аспірату кісткового мозку, кордової крові, фетальної печінки, ліпоаспірату
  • клональність TCR при Т-клітинних лімфопроліферативних захворюваннях
  • імунофенотипічна характеристика культур мезенхімальних мультипотентних стовбурових клітин кісткового мозку, жирової тканини, пуповини
  • імунофенотипічна характеристика культур кератиноцитів, меланоцитів, ендотеліоцитів, мієлоїдних прогеніторів і дендритних клітин, пухлин
  • експресія молекул адгезії
  • алергопроби in vitro по активації базофілів
  • фенотипування за HLA
  • субпопуляції тимоцитів, спленоцитів лабораторних тварин
  • активність фагоцитозу
  • функціональна активність тромбоцитів
  • аналіз ретикулоцитів

- аналіз ДНК і РНК

  • відсоток загиблих клітин в матеріалі
  • рівень цитотоксичності та мультирезистентності по відсотку загиблих клітин при спільному культивуванні з NK або препаратами
  • кінетика клітинного циклу в умовах активації, впливу препаратів, при пухлинному рості
  • апоптоз
  • фрагменти ДНК
  • міжнуклеосомальна деградація ДНК
  • синтез і розпад ДНК та РНК (каспази)
  • аналіз репортерів генів (FACS Gal, GFP)
  • кількість ДНК (плоїдність)
  • довжина теломер
  • аналіз siRNA

 - аналіз внутрішньоклітинних процесів

  • внутрішньоклітинні маркери (Toll-Like-рецептори)
  • мембранний потенціал плазматичної та мітохондріальної мембран
  • транспорт кальцію, магнію
  • внутрішньоклітинний рН
  • окисно-відновні процеси: супероксид, пероксид водню, оксид азоту
  • фосфорилювання внутрішньоклітинних протеїнів
  • транскрипційні фактори і сигнальні молекули (STAT) 
  • рівень внутрішньоклітинної продукції цитокінів, антитіл: IFN, IL, TNF
  • активність ферментів, лізосомальних протеїназ
  • пероксидація ліпідів
  • внутрішньоклітинні пігменти: хлорофіл, фікоеритрин
  • рівень глутатіону
  • функція мітохондрій, ендоплазматичного ретикулюма, ендосом, апарату Гольжі

- аналіз розчинених продуктів в біологічних рідинах, кондиційному середовищі

  • рівень імуноглобулінів
  • цитокіни
  • ростові фактори
  • ферменти
  • гормони

- сортування клітин

  • для наступного аналізу певної популяції (молекулярно-генетичні дослідження, протеоміка)
  • для культивування в експерименті
  • для трансплантації в експерименті
  • отримання моноклональних культур
  • сортування сперматозоїдів

 

 Приклад фенотипування субпопуляцій гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку
 з одночасним використанням панелі антитіл Lin, c-kit, Sca-1, CD150 та flt3

 picture

 
 
Приклади фенотипування субпопуляцій лімфоцитів периферичної крові
з використанням панелі антитіл CD3, CD4, CD8 та CD3, CD16-56, CD19

picture